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浓度测量方法：文献12提出了一种简单而通用的测量活细胞内荧光标记目标分子的细胞内浓度的方法。该方法基于染料荧光与量子产率和分子数量成正比的常识，通过已知浓度的一种染料和未知浓度的另一种染料的荧光比例以及特定的比例系数来确定未知染料的浓度。例如，在测量神经元中荧光标记的蛋白质浓度时，通过这种方法可以进行快速、廉价且可靠的定量分析13。自组织状态空间模型的应用：文献13提出了一种同时测量荧光强度和荧光信号的方法来估算细胞内Ca探针的浓度，并提出了细胞内Ca?（2+）动力学、膜电流测量过程和荧光信号强度测量过程被描述为状态空间模型，进而扩展为自组织状态空间模型，用粒子滤波法进行估计，通过数值实验验证了该方法的有效性，可以估计细胞内钙离子指示剂染料的浓度和钙离子浓度的时间过程。PAT 结合了光学的高对比度和声学的高分辨率的优势，在近红外光波段，血红蛋白有较高的吸收系数。山东光声荧光染料

在细胞内转运机制与ABC转运蛋白的关系：在某些细胞中，如多柔比星（DOX）-耐药乳腺*细胞（MCF-7/DOX），D-荧光素钾盐是ATP结合盒转运蛋白（ABCtransporters）的底物14。ABC转运蛋白在细胞内负责物质的转运，包括将某些物质排出细胞外。研究发现，β-榄香烯（β-ELE）可以通过两种方式影响D-荧光素钾盐在细胞内的转运。一是减弱ABC转运蛋白的功能，从而减少D-荧光素钾盐的外排；二是下调ABC转运蛋白的基因和蛋白表达量，同样减少D-荧光素钾盐的外排14。在多药耐药中的作用：ABC转运蛋白与多药耐药（MDR）现象密切相关。在耐药细胞中，ABC转运蛋白过度表达，会将化疗药物等排出细胞外，降低药物的疗效。而D-荧光素钾盐作为ABC转运蛋白的底物，其在细胞内的转运情况可以反映ABC转运蛋白的功能状态。因此，通过研究D-荧光素钾盐的转运机制，可以为理解和逆转多药耐药提供线索14。陕西荧光染料将近红外荧光染料置于不同温度下，观察其荧光强度的变化。

GFP替代化学荧光染料的启示：直到大约20年前，科学家依赖于化学荧光染料使生物分子可见。随后化学方法因GFP（一种发光的绿色水母蛋白）而取代。科学家使用遗传伎俩将GFP粘在其他细胞蛋白上，这种方式使研究人员更简单地追踪显微镜下的蛋白质运动而不使用昂贵的合成染料。然而，GFP是一种相对“笨重的”分子，从有限的天然氨基酸中构成，并不总是很明亮。这表明可以通过调整染料结构来优化性能，使其更加明亮且便于使用2025。三、定制荧光染料基于混合标记和矩阵评分方法：对亲和力和动力学的定量评估是开发（以受体为靶标）放射性示踪剂的关键组成部分。对于荧光示踪剂，目前尚不进行这种评估，而荧光组分化学成分的（小）变化可能会对荧光示踪剂的总体性能产生重大影响。同时包含放射性标记和荧光染料的混合成像标记可用于评估目标示踪剂的亲和力（荧光标记）和体内分布（放射性标记）。提出了一种基于混合标记和基于矩阵的评分方法，该方法能够定量评估（总体）电荷和荧光标记的亲脂性对alpha（v）beta（3）-整合素靶向示踪剂（体内）特征的影响。显示荧光染料的系统化学变化导致不同杂交示踪剂的体内分布存在明显差异。

结构修饰以适应不同条件增强对特定生物标志物的敏感性：Lysophosphatidicacids(LPA)是几种生理过程的关键生物标志物。为了更好地检测LPA，合成了带有结构适应性的苯乙烯基吡啶鎓染料，通过详细研究结构对聚集诱导荧光猝灭程度的影响，使其在水性介质中对LPA具有增强的亲和力。光谱研究结合时间分辨荧光测定揭示了激基缔合物形成对荧光探针的荧光猝灭机制的贡献。DFT计算支持了结构对检测灵敏度影响的实验观察22。改变供、吸电子基团：二胺基二苯甲酸酯（DAT）具有双重推拉电子结构、分子内氢键，使其具有优异的荧光特性。通过改变DAT的供、吸电子基团可以改变单苯环荧光染料的荧光发光行为。例如，在供电子基团上引入氧原子或在胺基上引入吸电子的单、双Troc基团，降低供电子能力，使得染料荧光光谱蓝移。化合物2、7、8用于化学变色荧光墨水，在书写中可以实现颜色从橙黄色依次到黄绿色、无色的转变29。综上所述，通过引入特定基团、调整结构、定制染料、优化合成方法以及进行结构修饰等方式，可以有效地改变荧光染料的分子结构，从而优化其性能，满足不同领域的应用需求。通过将近红外荧光染料封装在 ZIF - 90 的孔隙中，制备了三种 ATP 响应的近红外荧光纳米探针。

传统方法与新方法对比：传统的全局染料处理方法在测量细胞内离子浓度时，存在信噪比低的问题，尤其是在检测低浓度离子时。文献10指出“荧光染料通常用于生化测量，例如pH和离子浓度。它们，特别是当用于检测低浓度的离子时，具有较低的信噪比（SNR）”。而新的方法，如使用少量的荧光染料涂层磁性纳米颗粒进行点播，可以准确地聚集纳米颗粒，从而在细胞内局部区域内进行荧光染料的细胞内测量，能够实现明显更高的SNR和更低的细胞毒性11。磁微操纵系统的应用：与现有的产生大群（几个微米以上）或无法将产生的群移动到任意位置的磁微操纵系统不同，文献10中发明了一种五极磁微操纵系统和技术来产生小群（例如1?m；能够产生从0.52?m到52.7?m的磁群，误差＜7.5％）并精确定位小群（位置控制精度：0.76?m）。这种系统可以使用不同的荧光染料涂层磁性纳米颗粒进行细胞内离子浓度的定位测量。在小动物体内成像中，荧光扩散光学成像通过收集从组织中出射的扩散光，重建出组织内部的荧光产率分布。中国香港荧光染料DIL

将吲哚菁绿（ICG）掺入小杯芳烃（S4 - 6）胶束中，可以明显改善 ICG 的水稳定性和荧光亮度。山东光声荧光染料

标记神经元：在动物体内，特定的荧光染料可以稳定且持久地标记皮质脊髓神经元，用于病理生理学研究和切片膜片钳研究。如将Fluoro-Red和Fluoro-Green注入麻醉新生大鼠的颈脊髓，固定的脑切片显示出离散的内部皮质层中细长或金字塔形细胞轮廓中的***荧光，与V层锥体细胞一致，并且标记的神经元使用切片膜片钳方法显示出自发突触活动4。用于细菌成像：有机荧光染料可用于大肠杆菌的超分辨率成像实验。通过分光光度计测定大肠杆菌的生长曲线，以及将大肠杆菌与有机荧光染料尼罗红共孵育，在超分辨率显微镜下实现了大肠杆菌细胞壁的荧光标记。这一实验既结合了生物化学和分析化学相关实验及仪器的原理和操作，也有利于学生深入了解新型的细菌荧光标记技术6。近红外荧光寿命成像：近红外（NIR）染料在小动物成像和漫射光学断层扫描中用作荧光标记。通过三种方式将现有的共聚焦和多光子激光扫描显微镜（LSM）与时间相关单光子计数（TCSPC）荧光寿命成像（FLIM）系统相适应，用于近红外FLIM。测试的许多近红外染料在生物组织中显示出明显的寿命变化，取决于它们所结合的组织结构，因此近红外FLIM可以提供有关组织组成和局部生化参数的补充信息7。山东光声荧光染料